慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础，使用疱疹病毒VSVG 外壳蛋白发展起来的基因治疗载体，其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代。是逆转录病毒的一种，基因组为单链RNA。其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒可将外源基因整合到基因组中实现稳定表达，具有感染分裂期与非分裂期细胞的特性。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因转导效果。       

慢病毒基因组进入细胞后，在细胞浆中反转录为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白或产生小RNA。慢病毒介导的基因表达或小RNA干扰作用持续且稳定，并随细胞基因组的分裂而分裂。

慢病毒载体具有宿主范围广，免疫原性低，基因容量大，可以长期表达等特点。能够有效地感染培养的肿瘤细胞、肝细胞、心肌细胞、神经元、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。

慢病毒的感染具有整合特性，能够将外源基因有效地整合到宿主染色体上，达到持久性表达，因而可构建稳定细胞株，用于基因的细胞功能研究。借助慢病毒载体改造T细胞可用于CAR-T细胞治疗。

慢病毒包装与纯化

慢病毒包装采用三质粒或四质粒系统进行包装，收集细胞培养上清，通过超速离心浓缩纯化和收集病毒。

慢病毒滴度检测

检测方法：荧光法，药筛法，定量PCR

实验原理：基于慢病毒载体各自带有的载体元件（是否存在荧光标记如GFP，RFP，是否带有真核筛选标记比如puromycin）等选择合适的方法进行检测。不排除多种方法联用进行滴度检测。

慢病毒载体优势

表达时间长：

慢病毒可将外源基因整合到宿主细胞基因组上，实现基因长时间稳定的表达，不随细胞分裂传代而丢失，是细胞实验的首选，常用于构建稳定株。
安全性高：未发现致病性，慢病毒载体改造T细胞用于CAR-T细胞治疗。
免疫原性低：直接注射活体组织不易造成免疫反应，适用于动物实验。
感染范围广：能感染分裂和非分裂细胞，且对原代细胞也有较强感染能力。

常用慢病毒载体可供您选择

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